Please use this identifier to cite or link to this item: http://dspace.onu.edu.ua:8080/handle/123456789/9646
Title: Біохімічні властивості карбоксипептидази А нетрансформованої тканини та доброякісного новоутворення молочної залози
Other Titles: Биохимические свойства карбоксипептидазы А нетрансформированной ткани и доброкачественного новообразования молочной железы
Biochemical properties of carboxypeptidase А from non-transferred tissue and benignant tumor tissue of the mammalian gland
Authors: Філіпцова, К. А.
Вовчук, Iрина Леонiдiвна
Филипцова, Е. А.
Вовчук, Ирина Леонидовна
Filiptsova, K. A.
Vovchuk, Iryna L.
Citation: Вісник Одеського національного університету = Odesa National University Herald
Issue Date: 2016
Publisher: Одеський національний університет імені І. І. Мечникова
Keywords: карбоксипептидаза А
біохімічні властивості
молочна залоза
новоутворення
биохимические свойства
молочная железа
новообразование
carboxypeptidase A
biochemical properties
mammalian gland
tumor
Series/Report no.: Біологія;Т. 21, вип. 2(39)
Abstract: Досліджено біохімічні властивості карбоксипептидази А (КА) нетрансформованої тканини та доброякісного новоутворення молочної залози. Ферменти отримували за допомогою поетапного фракціонування (NH4)2SO4, діалізу в присутності 2 мМ Zn++ та гельхроматографії та сефадексі – G 75. Встановлено, що КА нетрансформованої тканини та доброякісного новоутворення молочної залози подібні за субстратною специфічністю, неконкурентним типом інгібування фенілаланіном та впливом інгібіторів і активаторів, за винятком лейпептину, тозилгептанолу і диметилмоліемідангідриду, але відрізняються за спорідненістю до карбобензоксиглутамілфенілаланіну та чутливістю до фенілаланіну. Для КА нетрансформованої тканини молочної залози встановлено Кm = 0,24 мМ і Кі = 0,40 мМ, а для КА доброякісного новоутворення – Кm = 0,14 мМ і Кі = 0,16 мМ.
Проблема. Лизосомальная карбоксипептидаза А [КФ 3.4.17.1] – цинксодержащая протеаза, которая принимает активное участие на заключительных этапах протеолиза и регуляции метаболизма клеток при многих физиологических и патологических процессах. Цель. Изучение биохимических свойств карбоксипептидази А нетрансформированной ткани и доброкачественного новообразо- вания молочной железы. Методы. Отбор анатомического материала для исследований проводили с соблюдением этичных и правовых норм. Ферменты получали с помощью поэтапного фракционирования (NH4)2SO4, диализа в присутствии 2 мМ Zn++ и гель-хроматографии на сефадексе – G 75. Исследования субстратной специфичности ферментов проводили по гидролизу субстрата карбобензоксиглутамилфенилаланина, фенилаланилаланина, глутамил – тирозина, пролилаланина (2,0 мМ), гемоглобина и казеина (2,0 %). Влияние ингибиторов и активаторов определяли в присутствии: ДТТ, Zn++, цистеина, тритона Х-100, соевого ингибитора трипсина, лейпептина, пепстатина, ПХМБ, ФМСФ, диметилмолиэмидангидрида, тозилгептанола, меркаптоэтанола, ЕДТА и 1,10 – фенатролина. Скорость реакции (Vmax), константу Михаэлиса (Кm), тип ингибирования и константу ингибирования (Кі) анализировали по Лайнуиверу – Берку. Результаты. Карбоксипептидаза А нетрансформированной и опухолевой ткани молочной железы лучше расщепляет субстраты, которые имеют гидрофобные и ароматические аминокислоты. Активность карбоксипептидазы А добро- качественного новообразования молочной железы больше всего ингибируется под влиянием лейпептина, тозилгептанола и диметилмолиэмидангидрида, в отличии от нетрансформированной ткани. Для карбоксипептидазы А нетрансформированной ткани молочной железы установлено Кm = 0,24 мМ и Кі = 0,40 мМ, а для карбоксипептидазы А доброкачественного новообразования – Кm = 0,14 мМ и Кі = 0,16 мМ. Выводы. Карбоксипептидаза А нетрансформированной ткани и доброкачественного новообразования молочной железы сходны по субстратной специфичности, неконкурентному типу ингибирования фенилалани- ном и по влиянию ингибиторов и активаторов, за исключением лейпептина, тозилгептанола и диметилмолиэмидангидрида, но отличаются по сродству к карбобензоксиглутамилфенилаланину и чувствительности к фенилаланину.
Introduction. Lysosomal carboxypeptidase A [КE 3.4.17.1] is a zinc-dependent protease that participates actively at the terminal stages of proteolysis and regulation of metabolism of cells in many physiological and pathological processes. Purpose. To study biochemical properties of carboxypeptidase A from non-transformed tissue and benignant tumor tissue of the mammalian gland. Methods. Sampling of anatomical materials for research was conducted with compliance of ethical and legal standards. Excretion of the enzymes included gradual fractionation with the (NH4)2SO4, dialysis in presence of 2.0 мМ Zn++ and gel chromatography on the sephadex – G 75. The investigation of the substrate specificity of the enzymes was held by hydrolysis of the substrate of carbobenzoxyphenylalanine, phenylalanylalanine, glutamyltyrosine, prolylalanine (2.0 mM), haemoglobin and casein (2.0 %). The influence of inhibitors and activators was determined in presence of: DTT, Zn++, cysteine, triton X-100, soybean trypsin inhibitor, leupeptin, pepstatin, PHMB, FMSF, dimethylmolyemydanhydride, tozylheptanol, mercaptoethanol, EDTA and 1.10 – phenanthroline. The maximal velocity (Vmax), Mihaelis constant (Km), inhibition type and inhibition constant (Ki) analysed by Laynuiveru – Berku method. Results. Carboxypeptidase A from non-transformed tissue and benignant tumor of the mammalian gland better splits the substrates, which have hydrophobic and aromatic amino acids. The activity of carboxypeptidase A from the benignant tumor of the mammalian gland is inhibited most of all under influence of leupeptin, tozylheptanol and dimethylmolyemydanhydride, in contrast to non-transformed tissue. For carboxypeptidase A from non-transformed tissue of the mammalian gland Km = 0.24 mM and Ki = 0.40 mM were determined, for carboxypeptidase A from the benignant tumor tissue of the mammalian gland – Km = 0.14 mM and Ki = 0.16 mM. Conclusion. Carboxypeptidase A from non-transformed tissue and benignant tumor of the mammalian gland is identical as to the substrate specificity, inhibition by phenylalanine for noncompetitive type, inhibition and activation effect by reagent with the exclusion of leupeptin, tozylheptanol and dimethylmolyemydanhydride, but differ as to affinity to carbobenzoxyphenylalanine and sensitivity to phenylalanine.
URI: http://dspace.onu.edu.ua:8080/handle/123456789/9646
Appears in Collections:Вісник Одеського національного університету. Біологія

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
24-36.pdf464.84 kBAdobe PDFThumbnail
View/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.