Please use this identifier to cite or link to this item: http://dspace.onu.edu.ua:8080/handle/123456789/8805
Title: Выделение матриксной металлопротеиназы-2 из нетрансформированной ткани молочной железы женщин
Other Titles: Виділення матриксної металопротеїнази–2 з нетрансформованої тканини молочної залози жінок
Isolation of matrix metalloproteinase-2 from nonmalignant breast tissues in women
Authors: Мотрук, Н. В.
Motruk, N. V.
Citation: Вісник Одеського нац. університету: сер.: Біологія : наук. журн. / ОНУ ім. І.І. Мечникова . – Одеса : ОНУ ім. І.І. Мечникова, 2012 Предыдущее заглавие : Вісник Одеського нац. університету = Вестник Одесского нац. университета . - До 2012 року див. під валовою нумерацією. Вісник Одеського нац. університету: сер.: Біологія . – 2016 . – Т.21, вип. 1 (38) .
Issue Date: 2016
Publisher: Одеський національний університет
Keywords: матриксная металлопротеиназа-2
молочная железа
фракционирование
сульфат аммония
матриксна металопротеїназа-2
молочна залоза
фракціонування
сульфат амонія
matrix metalloproteinase-2
breast
fractionation
ammonium sulfate
Series/Report no.: Біологія;Т.21, вип. 1 (38), с. 11-20.
Abstract: Матриксная металлопротеиназа-2 (ММП-2) – цинксодержащая, кальций-зависимая внеклеточная протеиназа (КФ 3.4.24.24), которая участвует в реорганизации внеклеточного матрикса. Проведена разработка метода выделения ММП-2 из нетрансформированной ткани молочной железы женщин. Максимальная удельная активность ММП-2 установлена во фракции, 60 % насыщения (NH4)2SO4 в присутствии ионов Zn2+ и Са2+. Наибольшая очистка ММП-2 (в 231,77 раза) и максимальный процент выхода ММП-2 (349,41 %) получены во фракции 60 % насыщения (NH4)2SO4 в присутствии ионов Са2+.
Матриксна металопротеїназа-2 (ММП-2) – кальцій-залежна та цинквмісна позаклітинна протеїназа (КФ 3.4.24.24), яка бере активну участь у реорганізації позаклітинного матриксу при багатьох фізіологічних і патологічних процесах. Мета дослідження – розробка методу виділення ММП-2 з нетрансформованої тканини молочної залози жінок. Для отримання ММП-2 з тканини молочної залози була використана модифікована методика Cawston and Tyler (1979). Модифікація полягала в по- етапному осадженні (NH4)2SO4 і використанні іонів Zn2+ і Са2+ для активації та стабілізації активності ферменту. Відбір анатомічного матеріалу для досліджень проводили з дотриманням етичних і правових норм. Гомогенати досліджуваних тканин діалізували про- ти дистильованої води без солей, а також з 2,0 мМ розчинами ZnCl2, CaCl2 або їх суміші. Діалізати піддавали поетапному фракціонуванню (осадження при 20, 40, 60 та 80 %-му насиченні) (NH4)2SO4 з подальшим центрифугуван- ням при 9000g впродовж 45 хв. Для видалення надлишку (NH4)2SO4 фракції піддавали повторному діалізу у тих же умовах. Активність ММП-2 визначали за гідролізом 0,001 % розчину желатини, вміст білку – методом Лоурі. Максимальна питома активність ММП-2 встановлена у фракції, отриманої при 60 %-му насиченні (NH4)2SO4 у присутності суміші іонів Zn2+ і Са2+. Найбільша очистка ММП-2 (у 231,77 рази) і максимальний відсоток виходу ферменту (349,41 %) отримані у фракції 60 %-го насичення (NH4)2SO4 у присутності іонів Са2+. Значне збільшення коефіцієнта очистки під час фракціонування (NH4)2SO4 у присутності іонів Zn2+ і Са2+ свідчить про необхідність додавання цих іонів для активації і стабілізації структури ферменту. Результати проведених досліджень свідчать про те, що поетапне осадження сульфатом амонію призводить до фракціонування ММП-2 нетрансформованої тканини молочної залози жінок переважно при 60 % – 80 %-му насиченні (NH4)2SO4 (85,0 % усієї активності). Наявність протеїназної активності у фракціях, отриманих при інших насиченнях (NH4)2SO4, що складає 15,0 % сумарної активності ферменту, свідчить, найімовірніше, про наявність множинних форм ММП-2.
Matrix metalloproteinase – 2 (ММР-2) is zinc- and calcium-dependent extracellular proteinase which takes part in reorganizations of extracellular matrix in many physiological and pathological processes. The research aim is to develop the method of ММP-2 isolation from the nonmalignant tissue mammary gland in women. To obtain MMP -2 from breast tissues a modified method of Cawston and Tyler (1979) was used. Modification consisted in gradual precipitation of (NH4)2SO4 and application of Zn2+ and Са2+ ions for activation and stabilization of enzyme activity. Sampling of anatomical materials for research was conducted with compliance of ethical and legal standards. The homogenates of the resected tissues were dialyzed against the distilled water without salts and also with 2.0 mM solutions of ZnCl2, CaCl2 or mixtures of these salts. Dialysates were subjected to step-by-step fractionating (besieging at 20, 40, 60 and 80 % saturation) of (NH4)2SO4 with subsequent centrifugation at 9000g for 45 minutes. Resulting fractions were subjected to the repeated dialysis under the same conditions to remove the excess of (NH4)2SO4. Activity of ММP-2 was detected by hydrolysis of 0.001 % gelatin solution, the protein content – by the Loury method. The maximal specific activity of ММP-2 was determined in the fraction obtained at 60 % saturation by (NH4)2SO4 in presence of mixture of Zn2+ and Са2+ ions. The highest purification of ММP-2 (231.77 times) and maximal percentage of enzyme yield (349.41 %) were obtained in fraction with 60 % (NH4)2SO4 saturation in presence of Са2+ ions. The substantial increase of purification coefficient during fractionating by (NH4)2SO4 in presence Zn2+ and Са2+ ions testifies to the necessity of adding these ions for activation and stabilization of the enzyme structure. The results of the research indicate that the step-by-step sedimentation by (NH4)2SO4 leads to the fractionation of ММP-2 of untransformed female breast tissues at 60- 80 % (NH4)2SO4 saturation (85.0 % of the entire activity). Presence of proteinase activity in the fractions obtained at other (NH4)2SO4 saturations, that is only 15.0 % of the total activity of enzyme, testifies, probably, to presence of multiple forms of ММP-2.
URI: http://dspace.onu.edu.ua:8080/handle/123456789/8805
Appears in Collections:Вісник Одеського національного університету. Біологія

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
11-20.pdf256.06 kBAdobe PDFThumbnail
View/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.